Alimentos  
Artículo arbitrado  
Principales virus que afectan al cultivo de  
papa y metodologías para su identificación y  
caracterización  
Main viruses affecting potato crop and methodologies for their  
identification and characterization  
1
1
ANA CECILIA GONZÁLEZ-FRANCO , MARIANA RODRÍGUEZ-RODRÍGUEZ  
1,2  
Y LORETO ROBLES-HERNÁNDEZ  
Recibido: Junio 3, 2013  
Aceptado: Noviembre 25, 2013  
Resumen  
Abstract  
El objetivo de esta revisión fue realizar una descripción de los  
principales virus que afectan al cultivo de papa, así como de las  
técnicas utilizadas actualmente para su detección e  
identificación. Algunos de los virus que más afectan al cultivo de  
papa en el mundo son PLRV, PVY y PVX, los cuales también  
pueden producir infecciones mixtas que aumenten aún más las  
pérdidas en rendimiento y calidad. Por lo anterior, el diagnóstico  
preciso de estos agentes causales es un requisito previo  
esencial para un control efectivo. Para este fin, un amplio  
espectro de métodos serológicos, bioensayos con plantas  
indicadoras y técnicas moleculares se han desarrollado y están  
actualmente en uso en muchos laboratorios de diagnóstico. Se  
espera que este manuscrito funcione como una guía para el  
personal que se encuentra involucrado en el diagnóstico y control  
de los principales virus fitopatógenos del cultivo de la papa.  
The aim of this review was to provide a description of the main  
viruses affecting potato crop as well as the techniques currently  
used for detection and identification. Some of the viruses that  
afflict potato crop in the world are PLRV, PVY, and PVX, which  
can also produce mixed infections that exacerbate yield and  
quality losses. Therefore, the accurate diagnosis of these causal  
agents is an essential prerequisite for effective control. Thus,  
a wide range of serological methods, bioassays with indicator  
plants and molecular techniques have been developed and are  
currently in use in many diagnostic laboratories. This manuscript  
will provide guidance to personnel that is involved in the  
diagnostic and control of the main phytopathogenic viruses of  
potato.  
Keywords: Solanaceae, PVY, PVX, PLRV, RT-PCR, Microarray,  
MIA.  
Palabras clave: Solanaceae, PVY, PVX, PLRV, RT-PCR, Microarray,  
MIA, virus de la papa.  
Introducción  
a papa es uno de los cultivos más importantes a nivel mundial, ocupando el cuarto  
lugar en producción (FAOSTAT, 2009). No obstante, se reportan más de 30 agentes  
virales que infectan este cultivo y que reducen su rendimiento y la calidad del  
L
tubérculo (Bradshaw et al., 2007).  
_
1
________________________________  
UniversidadAutónoma de Chihuahua. Facultad de CienciasAgrotecnológicas. Ciudad Universitaria S/N Campus 1 Chihuahua, Chih.,  
México. 31310. Tel. (614) 439-1844 ext. 3119.  
Dirección electrónica del autor de correspondencia: lrobles@uach.mx.  
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ANA CECILIA GONZÁLEZ-FRANCO, MARIANA RODRÍGUEZ-RODRÍGUEZ Y LORETO ROBLES-HERNÁNDEZ: Principales virus que afectan al  
cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
Figura 1. Plantas de papa cultivar Agata mostrando la  
sintomatología característica causada por PVX (Imagen de  
González-Franco, A.C. y Robles-Hernández, L.).  
Por su alta prevalencia y sus efectos en la  
producción, los virus más estudiados son Virus  
Y de la papa (PVY), Virus del enrollamiento de  
la hoja de papa (PLRV) y el Virus X de la papa  
(
PVX). Los síntomas del enrollamiento de las  
hojas causados por el PLRV, y los mosaicos  
ocasionados por PVX y PVY fueron de los  
primeros en ser observados en los cultivos de  
papa. Las enfermedades virales son las  
responsables primarias de la degeneración  
gradual de los cultivares, las cuales se traducen  
principalmente en la reducción del rendimiento  
(Salazar, 1997; Bradshaw et al., 2007).  
Las pérdidas en producción que puede  
causar este virus pueden ser superiores a 10%  
Estimar las pérdidas por infecciones virales  
es complicado, pues depende de diversos  
factores que incluyen las variantes virales, el  
cultivar y la edad de las plantas, los factores  
climáticos, la presencia de otros virus, entre  
otros (Guzmán, 2010). En muchos casos, la  
presencia conjunta de dos virus en la misma  
planta exacerba la expresión de los síntomas,  
aumentando las pérdidas (Bradshaw et al.,  
(CIP, 1996), pero puede llegar a ser un virus  
devastador si se presenta en infecciones mixtas;  
por ejemplo, cuando existe infección del PVX  
con el PVY, los síntomas se intensifican y las  
pérdidas pueden llegar a ser hasta 70%  
(Burrows, 2005; Asamenew, 2007).  
El PVX es un Potexvirus de la familia  
Alphaflexiviridae (ICTV, 2009). Tiene forma  
filamentosa de aproximadamente 550 nm de  
longitud y 11-18 nm de ancho; su genoma está  
compuesto por una sola hebra de ARN con  
polaridad positiva de aproximadamente 6,4 kb.  
Su genoma codifica para al menos cinco  
marcos de lectura abiertos (ORFs), donde el  
ORF 1 codifica para la replicasa viral (RdRp)  
de 166 kDa. Los ORF2, ORF3 y ORF 4 se  
superponen y comprenden un bloque triple de  
genes que codifican para las proteínas del  
movimiento (MP); el ORF2 codifica la proteína  
TGBp1 de 25 kDa, el ORF3 codifica la proteína  
TGBp2 de 12 kDa y el ORF4 codifica la proteína  
TGBp3 de 8 kDa. Finalmente, el ORF5, codifica  
a la cubierta proteica (CP), de 25 kDa  
2
007). Por otro lado, determinar la distribución  
y la variabilidad genética de dichos patógenos  
es fundamental para los programas de manejo  
integrado y mejoramiento genético de la papa  
(Gil et al., 2012). El objetivo de esta revisión es  
realizar una descripción de los principales virus  
que afectan al cultivo de papa, así como de las  
técnicas utilizadas actualmente para su  
detección e identificación.  
Virus x de la papa (PVX)  
El PVX es uno de los virus más comunes  
que infectan al cultivo de la papa y está distribuido  
mundialmente. PVX puede infectar a más de 240  
especies de plantas pertenecientes a 16 familias,  
siendo la Solanaceae la que concentra más  
hospederos para este virus.  
(
Asamenew, 2007). En su extremo 5' posee una  
Las plantas a menudo no muestran  
síntomas, pero cuando ocurren, el virus puede  
causar clorosis, mosaicos y reducción en el  
tamaño de la hoja (Figura 1). La fuente de este  
virus son los tubérculos infectados.Además, es  
transmitido mecánicamente y hasta ahora no  
se conocen insectos que actúen como vectores  
capucha de metil-guanosina y su extremo 3'  
está poliadenilado (Asamenew, 2007; Verchot  
et al., 2007). En la Figura 2 se esquematiza la  
conformación del genoma del virus PVX, donde  
cada caja representa un ORF y las líneas  
representan RNA genómico y tres RNA  
subgenómicos (RNAsg).  
(Burrows, 2005).  
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cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
Figura 2. Esquematización del genoma de PVX (Adaptado de  
Asamenew, 2007).  
mecánicamente. Varias especies de áfidos  
pueden transmitir el PLRV, pero el áfido Myzus  
persicae es el vector más importante (Gul et  
al., 2011).  
Figura 3. Síntoma de enrrollamiento de hoja en plantas de papa  
cultivar Felsina (Imagen de González-Franco, A.C. y Robles-  
Hernández, L.).  
Virus del enrollamiento de la hoja  
de la papa (PLRV)  
El PLRV causa una de las enfermedades  
virales más importantes en la papa. La  
enfermedad afecta el rendimiento y la calidad  
de los tubérculos. Las pérdidas en rendimiento  
son difíciles de cuantificar, pero pueden llegar  
hasta un 90%; estas pérdidas pueden ser casi  
tan altas como el porcentaje de plantas con  
síntomas visuales de infección (Jayasinghe,  
Figura 4. Síntomas de PLRV en plantas de papa cultivar Ruby  
1988; Gul et al., 2011).  
Lou. Izquierda: enrojecimiento de los márgenes de las hojas  
(Adaptado de Mortimer, 2010). Derecha: enrollamiento de hoja  
de papa (Gul et al., 2011).  
El virus se localiza en los tejidos del floema,  
donde causa necrosis y aumento en la síntesis  
de calosa, carbohidrato que bloquea el  
transporte del almidón de las hojas hacia los  
tubérculos provocando el enrollamiento de las  
hojas (Jayasinghe, 1988; Gul et al. 2011).  
Los síntomas primarios típicos para  
Solanum tuberosum ssp. tuberosum inician en  
las hojas apicales con enrollamiento, se observa  
crecimiento erecto y clorosis; después de cierto  
tiempo los síntomas se transfieren a las más  
viejas (Figura 3 y 4). Los síntomas secundarios  
se presentan con un crecimiento reducido y  
erecto. Las hojas inferiores se enrollan  
severamente y se vuelven rígidas (Jayasinghe,  
El PLRV es el miembro tipo de los polero-  
virus. Es un Luteovirus cuyas partículas virales  
son esféricas, no envueltas, con un diámetro  
de 24 nm (Jayasinghe, 1988). Su genoma es  
ARN lineal, monopartita de sentido positivo y  
mide 5987 nucleótidos de largo; posee una  
proteína viral unida al genoma (VPg) en su  
extremo 5´ pero carece de cola poliadenilada  
en su extremo 3´. Tiene seis marcos de lectura  
abierta (ORFs) dispuestas en dos bloques  
separados por una pequeña región intergénica  
1988; Gul et al., 2011).  
La mayoría de las variedades de papa no  
muestran síntomas en los tubérculos,  
solamente algunas como Russet Burbank y  
Green Mountain desarrollan necrosis reticulada  
en las células del floema de los tubérculos  
(Jayasinghe, 1988).  
(Li et al., 2007); sin embargo, de acuerdo con  
PLRV es transmitido por áfidos en una  
manera persistente-circulativa. También es  
transmitido por tubérculos infectados, pero no  
Taliansky et al. (2003) y Kaplan et al. (2007) hay  
ocho ORFs (Figura 5). El ORF0 codifica la  
proteína de 28 kDa P0 involucrada en la  
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cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
acumulación del virus (Sadowy et al., 2001). El  
ORF4 codifica para una proteína putativa de  
movimiento OP17 y su CP está implicada en la  
transmisión por vectores y movimiento del virus  
Las plantas infectadas con este virus presentan  
un menor crecimiento, con hojas arrugadas y  
fruncidas (Smith et al., 1988). En la planta de  
O
tabaco las cepas PVY causan aclarado de  
(
Kaplan et al., 2007).  
venas y epinastía, seguido de moteado de venas  
(
Figura 6). Dentro del grupo de PVY que no  
O
Figura 5. Esquema del genoma de PLRV. Los ORFs se muestran  
con los pesos moleculares aparentes de sus productos  
génicos (Adaptado de Jaag et al., 2003).  
producen necrosis, además de PVY , se  
C
Z
E
encuentran las cepas PVY , PVY y PVY , las  
cuales son reconocidas como inductoras de  
mosaico y manchas leves en las hojas (Smith  
et al., 1988; Karasev et al., 2010).  
N
El grupo necrótico, representado por PVY  
produce síntomas primarios leves en planta de  
papa; sin embargo, los síntomas secundarios  
suelen ser más claros y varían de un moteado  
atenuado a uno más grave. En plantas de  
N
tabaco, las cepas PVY causan síntomas  
O
Virus Y de la papa (PVY)  
primarios similares a PVY , con una aparición  
posterior de lesiones necróticas repartidas en  
las hojas; las venas primarias empardecen y  
las hojas colapsan prematuramente contra el tallo  
Las pérdidas en el rendimiento por causa  
de infecciones por el PVY se encuentran entre  
un 10 y un 80% dependiendo del cultivar, las  
características de la cepa viral, las condiciones  
de almacenamiento y del control de insectos y  
maleza; además, la necrosis del tubérculo  
puede afectar la calidad de los cultivos y reducir  
aún más el rendimiento comercial (Pérez y  
Rico, 2004).  
(Figura 6) (Smith et al., 1988; Delaunay, 2007).  
Las infecciones mezcladas de la raza  
O
N
común PVY y la necrótica PVY son frecuentes  
y sus genomas se pueden mezclar produciendo  
N-W  
NTN  
razas híbridas como PVY  
y PVY . Estas  
variedades son diferentes de las cepas  
parentales, serológicamente concuerdan con  
El PVY se encuentra distribuido en todo el  
mundo y es transmitido por al menos 70  
especies de áfidos de manera no persistente-  
no circulativa (Martínez et al., 2001).  
O
PVY , sin embargo, inducen síntomas de  
N
necrosis venal sistémica como PVY en plantas  
NTN  
de tabaco. Los aislados de PVY  
pueden,  
además, causar necrosis en los tubérculos de  
N-W  
Puede también trasmitirse mecánicamente  
y por semilla; sin embargo, los áfidos son el  
medio más veloz de transmisión, y el vector más  
eficaz es Myzus persicae (Smith et al., 1988;  
Pérez y Rico, 2004; Burrows y Zitter, 2005).  
papa (Figura 7). Los aislados PVY  
inducen  
necrosis venal en tabaco y mosaico leve en las  
hojas de papa (Smith et al., 1988; Delaunay,  
2007; Blanchard et al., 2008).  
Figura 6. Síntomas desarrollados en Nicotiana tabacum cv. xanthi  
Existen dos patotipos de PVY definidos  
sobre la base de los síntomas inducidos en la  
planta de tabaco, el grupo necrótico,  
tres semanas después de la inoculación con dos patotipos de  
O
PVY: A) Síntomas de mosaico por aislado tipo PVY y B) Necrosis  
N
venal por aislado tipo PVY (González-Franco, A.C. y Robles-  
Hernández, L.).  
N
representado por la cepa parental PVY y el no  
O
necrótico, cuya cepa parental es PVY  
(Blanchard et al., 2008).  
El grupo no necrótico causa en papa  
síntomas de tipo mosaico; los síntomas  
primarios son un moteado y una necrosis de  
los foliolos, seguida por la muerte de las hojas.  
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cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
Figura 7. Síntomas inducidos en tubérculo de papa cultivar  
En un estudio reciente se publicó el  
Yukon Gold por varios aislados de PVY perteneciendo al  
O
NTN  
descubrimiento de la presencia de un segundo  
ORF corto nombrado pipo y que se encuentra  
incrustado en el cistrón P3 del ORF antes  
descrito; este ORF pequeño resulta ser un gen  
conservado y característico de los virus de la  
familia Potyviridae (Chung et al., 2008).  
Estudios de interrupción de este gen  
demuestran que la capacidad de sobrevivencia  
e infectividad del virus se ve afectada (Chung  
et al., 2008); además, en otro estudio con un  
miembro distinto de la familia Potyviridae  
sugiere que este ORF pequeño está implicado  
en el movimiento intercelular (Vijayapalani et al.,  
patotipo PVY (Oz) y al PVY  
Adaptada de: Hu et al., 2009).  
(PB312, N4, HR1 y L26)  
(
El PVY es un Potyvirus miembro de la  
2
012).  
familia Potyviridae de RNA monocatenario  
positivo. Las partículas virales del PVY tienen  
una estructura helicoidal, de forma filamentosa,  
flexibles y miden unos 730 nm por 11 nm (Smith,  
Métodos de detección e identificación  
de los diferentes virus  
1
931; Smith et al., 1988; Burrows y Zitter, 2005;  
Kehoe y Jones, 2011). El genoma del PVY  
Figura 8) consta de aproximadamente 9.7 kb,  
Las pruebas biológicas de detección se  
basan en el análisis de la virulencia y la  
agresividad de los aislados virales, mediante el  
uso de plantas hospedantes indicadoras que  
expresan una gama de síntomas, de acuerdo  
con las diferentes propiedades del inóculo en  
estudio. Para la identificación y caracterización  
de PVY se utilizan principalmente Nicotiana  
tabacum cv. xanthi (hospedero susceptible a las  
(
el cual contiene un único marco de lectura  
abierto (ORF) flanqueado por regiones no  
codificantes, este ORF se traduce como un  
único polipéptido de aproximadamente 350 kDa  
con una proteasa VPg unida covalentemente al  
extremo 5´ mediante una tirosina y una cola de  
poli adenosina en el extremo 3´ del genoma  
N
NTN  
propiedades necróticas de PVY , PVY  
y
(
Susaimuthu et al., 2008) que es procesado  
N-Wi  
PVY ), donde se observa una severa necrosis  
proteolíticamente para madurar las proteínas  
virales: P1-pro, HC-Pro, y NIa. Los productos  
proteicos finales son: P1-pro, HC-Pro, P3, Cl-  
Helicasa, 6 kDa, NIa, NIb y CP (Martínez et al.,  
de nervaduras en sus hojas (Ramírez et al.,  
2006; Hu et al., 2009), y algunas variedades de  
papa que puedan expresar reacción de  
O
hipersensibilidad a PVY , y producción de  
2001; Astier et al., 2007).  
tubérculos con síntomas de necrosis cuando  
NTN  
están infectados por cepas del patotipo PVY  
Figura 8. Esquema del genoma del PVY (Adaptado de Astier et  
al., 2007).  
(
Hu et al., 2009; Galvino et al., 2012). Por otro  
lado, Chenopodium amaranticolor hace posible  
O
la distinción entre PVY que produce lesiones  
N
locales en la hoja inoculada y PVY que provoca  
infección sistémica (Salazar, 1990; Jacquot,  
2007).  
Para PLRV se pueden utilizar hospedantes  
como Physalis floridana y Datura stramonium  
que reaccionan con síntomas característicos;  
P. floridana presenta clorosis entre las  
nervaduras, ligero enrollamiento de la base de  
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cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
las hojas, reducción del tamaño de las hojas y  
del crecimiento de las plantas; las hojas  
infectadas sistémicamente desarrollan clorosis  
intervenal y las hojas más viejas pueden  
enrollarse ligeramente. D. stramonium desarrolla  
una fuerte clorosis entre las nervaduras  
identificación de aislamientos de acuerdo con  
sus patogrupos (sueros monoclonales), por  
N
O
ejemplo PVY vs PVY . Las características de  
la secuencia codificante para la proteína de la  
cubierta de los virus determina la especificidad  
de la detección serológica de los aislamientos  
(Jacquot, 2007).  
(Jayasinghe, 1988).  
Para la identificación de PVX se utilizan  
La aparición de nuevas variantes en ciertos  
NTN  
N-W  
como plantas indicadoras: Datura stramonium,  
Nicotiana tabacum y Gomphrena globosa L. En  
esta última, cuatro a cinco días después de la  
infección, presenta pequeñas manchas grises  
en el sitio de inoculación, que van aumentando  
de tamaño y se van rodeando de una zona  
rojiza. Las plantas afectadas en forma sistémica  
por el virus presentan zonas cloróticas o de  
mosaico entre las nervaduras de las hojas  
virus, como PVY  
y PVY  
evidenció las  
limitaciones de las herramientas inmuno-  
serológicas disponibles, ya que en algunos  
casos no es posible diferenciar entre las  
variantes virales, por ejemplo, anticuerpos  
N-W  
monoclonales y policlonales agrupan a PVY  
O
en el grupo PVY y no son capaces de hacer la  
NTN  
N
y aislados PVY  
distinción entre PVY  
(
Jacquot et al., 2011).  
(
UNAD, 2012).  
Inmunoensayo múltiple con microesferas  
(MIA). Fue diseñada como una alternativa a la  
Pruebas serológicas  
ELISA y permite la detección de varios antígenos  
simultáneamente, mientras que la técnica ELISA  
solo permite la detección de un solo antígeno por  
reacción. Otra ventaja de MIA es el tiempo  
requerido para el procesamiento de muestras,  
ya que requiere aproximadamente 2 h, mientras  
que el DAS-ELISA se completa generalmente en  
Estas pruebas se basan en la alta  
especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo,  
en la que un anticuerpo reconoce e interacciona  
sólo con la porción de antígeno que le dio origen,  
o con otra muy semejante (Nome, 1995). La  
técnica ELISA fue desarrollada en 1971 para  
emplearla en medicina, y adaptada en 1977 a  
la patología vegetal, en especial para la  
detección de virus en plantas. La técnica ELISA  
tipo sándwich es la más utilizada para la  
detección de virus fitopatógenos. La prueba  
consiste, en un primer paso, en sensibilizar la  
superficie de las celdillas del plato o placa con  
una capa de anticuerpo primario, luego se  
coloca la muestra y se añade el anticuerpo  
secundario, pero esta vez conjugado con una  
enzima; una reacción positiva se observa con  
un cambio de color provocado por la unión del  
sustrato a la enzima. Este ensayo tiene una gran  
especificidad y sensibilidad debido a la  
amplificación de señal que permite el segundo  
anticuerpo (Nome, 1995; Rivers, 2007).  
16 h (Bergervoet et al., 2008). Los fundamentos  
de la técnica MIA se describen a continuación.  
Las perlas utilizadas se tiñen internamente con  
dos fluorocromos y para cada conjunto de  
microesferas se puede conjugar un anticuerpo  
específico (Bergervoet et al., 2008). Las perlas  
recubiertas de anticuerpos se añaden a las  
muestras después de la transferencia a una  
placa de microtitulación. Posteriormente, se  
añaden los anticuerpos secundarios conjugados  
con un fluorocromo reportero, y se miden en un  
analizador multiparamétrico (Earley et al., 2002).  
El analizador multiparamétrico excita los tintes  
internos de las microesferas con un láser rojo, y  
al fluorocromo reportero, capturado por el antígeno,  
con un láser verde (Bergervoet et al., 2008). Esta  
técnica fue utilizada por Bergervoet et al. (2008)  
en una muestra vegetal naturalmente infectada  
con PVX, PVY y PLRV, obteniendo resultados  
comparables con la técnica DAS-ELISA.  
De acuerdo a la variabilidad de cepas de  
algunos virus fitopatógenos, se han creado  
sueros que hacen posible la detección de todos  
los aislamientos de alguna especie de virus en  
específico como PVY (sueros policlonales) o la  
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cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
En el caso del estudio de virus fitopató-  
Pruebas moleculares  
genos, las investigaciones que utilizan la  
Las diferencias genéticas entre los  
secuenciación de genes están enfocadas  
genomas virales pueden ser utilizadas como  
principalmente a el análisis filogenético de los  
objetivos específicos para la detección  
diversos tipos de virus, ya que continuamente  
molecular y la identificación de los aislados  
se encuentran nuevas cepas con caracte-  
virales (Delaunay, 2007). Aunado a lo anterior,  
rísticas serológicas que no concuerdan con el  
la tendencia actual se orienta hacia las  
daño que ocasionan en plantas indicadoras o  
estrategias para una rápida identificación de  
más de un patógeno a través del desarrollo de  
múltiples plataformas de análisis (Cheng et al.,  
con los resultados de las pruebas de  
identificación por RT-PCR (Hu et al., 2009;  
Robles et al., 2010; Galvino et al., 2012).  
2013).  
PCR en tiempo real. Esta técnica se ha  
convertido en el método más preciso y sensible  
para la detección y cuantificación de patógenos  
de plantas. Es una variante de la PCR, la cual  
es utilizada para amplificar y cuantificar  
simultáneamente el producto de la amplificación  
La transcripción reversa de la reacción en  
cadena de la polimerasa (RT-PCR) múltiple. La  
RT-PCR es una de las pruebas moleculares  
más utilizadas en la detección de virus de  
plantas, donde una hebra deARN es empleada  
para sintetizarADN complementario (ADNc), el  
cual es posteriormente amplificado en un PCR  
tradicional (Vázquez, 2003). Se le llama PCR  
múltiple cuando se amplifica simultáneamente  
más de una secuencia de ADN en una sola  
corrida; para ello, se combinan dos o más pares  
de cebadores específicos en un mismo tubo,  
junto con el resto de los reactivos de la reacción.  
Para la detección y tipificación de algunos virus,  
existen ensayos de PCR múltiple en los que en  
una sola reacción se logran diferenciar patotipos  
virales (Lorenzen et al., 2008; Hu et al., 2009).  
(
Zipper, 2004).  
El uso de un sistema de un solo tubo para  
múltiples repeticiones de la PCR en tiempo real  
tiene la ventaja sobre un sistema de dos etapas,  
ya que estos métodos no se basan en la  
electroforesis en gel de agarosa de los  
amplicones, que requieren una manipulación de  
tubo abierto, reduciendo el riesgo de  
contaminación y el riesgo de resultados falsos  
positivos (Agindotan et al., 2007; Cheng et al.,  
2
013). La temperatura de fusión (Tm) de las  
secuencias diana expande el poder del análisis  
en tiempo real, ya que la temperatura de fusión  
se basa en las características de disociación  
de ADN de doble cadena y permite que este  
análisis sea específico para el fragmento diana  
Un ensayo convencional múltiple de RT-  
PCR puede detectar PVY y PLRV con éxito en  
muestras de tubérculos de papa latentes, lo cual  
representa una ventaja en comparación con  
ELISA, que necesita de hojas para la obtención  
de la muestra. Además, se considera que la RT-  
PCR múltiple proporciona respuestas rápidas  
y mayor garantía de calidad en la detección que  
la prueba de ELISA (Mortimer et al., 2009).  
(
Chomic et al., 2011).  
El producto de amplificación se genera a  
través de PCR en tiempo real en presencia de  
un colorante fluorescente. El colorante se  
intercala en el interior del surco menor de la hélice  
y emite fluorescencia brillante en estadoADN de  
doble cadena. Siguiendo la amplificación en  
tiempo real, la etapa de fusión se lleva a cabo  
mediante el aumento paulatino de la temperatura,  
que resulta en la disociación del producto de  
amplificación de doble cadena y la liberación del  
colorante fluorescente. La disminución de la  
fluorescencia se puede convertir en picos de  
fusión (Chomic et al., 2011).  
Secuenciación de genes y análisis  
filogenético. El método más utilizado es la  
secuenciación dideoxi. El término proviene de  
un nucleótido especial modificado, llamado  
trifosfato dedidesoxinucleótido (ddNTP). Este  
nucleótido tiene la capacidad de bloquear la  
síntesis de ADN por carecer del grupo 3´  
hidroxilo (Griffiths, 2004).  
1
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ANA CECILIA GONZÁLEZ-FRANCO, MARIANA RODRÍGUEZ-RODRÍGUEZ Y LORETO ROBLES-HERNÁNDEZ: Principales virus que afectan al  
cultivo de papa y metodologías para su identificación y caracterización  
El análisis de pico de fusión utilizando un  
colorante simple ofrece un método sensible,  
específico, rápido y de alto rendimiento para la  
detección y diferenciación de varios virus a la  
vez; por ejemplo, se ha reportado la  
identificación de hasta cinco virus de la papa  
en una sola corrida incluyendo a PVX, PVY,  
PLRV, PVA y PVS (Cheng et al., 2013).  
distinguir fielmente entre tipos del virus, ya que  
los síntomas pueden ser muy similares entre  
enfermedades virales; además, estos varían  
con la edad, el momento de infección, la  
temperatura, y la genética, tanto del virus como  
de la planta huésped.Así mismo, se pueden dar  
reacciones serológicas cruzadas entre virus  
relacionados o reacciones serológicas no  
recíprocas entre pares de virus. Cuando existen  
infecciones mixtas, la RT-PCR puede fallar al  
detectar todas las variantes de secuencias o  
especies, o puede amplificar preferentemente  
algunos virus (Wei et al., 2009; Holland y Jones,  
Microarreglos de DNA. El principio de los  
microarreglos radica en la hibridación del ácido  
nucleico marcado con fluorescencia o  
radioactividad a sus secuencias complemen-  
tarias en una superficie sólida, que actúa como  
sonda. La principal ventaja de este método con  
respecto a las técnicas de biología molecular  
como la reacción en cadena de la polimerasa,  
es la oportunidad de detectar simultáneamente  
en un único procesamiento muchos patógenos.  
Hasta decenas de miles de sondas de ADN se  
pueden detectar en la configuración definida en  
un portaobjetos de microscopio de vidrio que  
forma el chip (Bystricka et al., 2005).  
2006). Por lo antes mencionado, el uso conjunto  
de múltiples técnicas (biológicas, serológicas y  
moleculares) es necesario para una  
identificación y caracterización más precisa de  
los agentes virales.  
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Para la identificación de virus, las sondas  
son secuencias de genes de cada uno de los  
virus que deben ser detectados en un único  
ensayo. Dicha micromatriz puede ser expuesta  
aADNc marcado con fluorescencia de la muestra  
a analizar y, finalmente, la placa se escanea para  
revelar si alguno de los objetivos estaban  
presentes en la muestra (Boonham et al., 2003).  
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El método ha demostrado ser capaz de  
discriminar secuencias con alto grado de  
identidad de secuencia, por lo que el ensayo  
podría ser utilizado para detectar cepas  
estrechamente relacionadas de virus, tales  
como las cepas de PVY, con más de 89% de  
identidad de secuencia. La sensibilidad de esta  
técnica es comparable con la técnica ELISA  
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Es importante mencionar que el uso de una  
sola técnica, ya sea biológica, serológica o  
molecular, no es suficiente para diagnosticar el  
agente viral causal de una enfermedad en  
plantas. La sintomatología por sí sola no permite  
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ANA CECILIA GONZÁLEZ-FRANCO, MARIANA RODRÍGUEZ-RODRÍGUEZ Y LORETO ROBLES-HERNÁNDEZ: Principales virus que afectan al  
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Este artículo es citado así:  
González-Franco, A. C, Mariana Rodríguez-Rodríguez y Loreto Robles-Hernández. 2014. Principales virus que afectan  
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Resumen curricular del autor y coautores  
LORETO ROBLES HERNÁNDEZ. Título de Ingeniero Fruticultor (1992) y grado de Maestro en Ciencias de la Productividad Frutícola (1998)  
por la UniversidadAutónoma de Chihuahua, y grado de Doctor en Fitopatología (2004) por la Universidad de Idaho, USA. Es profesor  
investigador en la Universidad Autónoma de Chihuahua. Realiza investigación en el estudio de enfermedades de cultivos hortícolas.  
Imparte los cursos de Fitopatología, Microbiología, Control Biológico y Fisiología y Tecnología de Poscosecha. Ha desarrollado  
proyectos de investigación con financiamiento externo. Ha dirigido y concluido varias tesis de maestría y licenciatura. Ha publicado  
capítulos de libros, artículos científicos y resúmenes en memorias de congresos nacionales e internacionales. Es miembro del  
Sistema Nacional de Investigadores (SNI), cuenta con el nombramiento de Perfil Deseable por la SEP-PROMEP y tiene dos primeros  
lugares por la presentación de los mejores trabajos de investigación, otorgados por la Sociedad Mexicana de Fitopatología y la  
Asociación Mexicana de Microbiología, respectivamente. Es revisor del Journal Plant Disease y de la Revista Mexicana de Fitopatología.  
ANA CECILIA GONZÁLEZ FRANCO. Título de Químico Bacteriólogo Parasitólogo en 1992 y grado de Maestro en Ciencias de la Productividad  
Frutícola en 1995 por la UniversidadAutónoma de Chihuahua. Obtuvo su Doctorado en Microbiología, Biología Molecular y Bioquímica  
(2004) en la Universidad de Idaho, USA. Es profesor investigador en la Universidad Autónoma de Chihuahua. Realiza investigación  
en el Control Biológico de Enfermedades y en la Interacción-Microorganismo-Planta. Imparte las cátedras de Interacción-  
Microorganismo-Planta, Bioquímica, Química y Biotecnología. Ha desarrollado proyectos de investigación con financiamiento externo.  
Ha dirigido y concluido varias tesis de maestría y licenciatura. Ha publicado artículos científicos y resúmenes en memorias de  
congresos nacionales e internacionales. Cuenta con el nombramiento de Perfil Deseable por la SEP-PROMEP y tiene dos primeros  
lugares por la presentación de los mejores trabajos de investigación, otorgados por la Sociedad Mexicana de Fitopatología y la  
Asociación Mexicana de Microbiología, respectivamente.  
MARIANA RODRÍGUEZ RODRÍGUEZ. Egresada de la Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de Chihuahua en el 2010.  
Obtención del título de Químico Bacteriólogo Parasitólogo con la tesis titulada: "Obtención de principios activos de plantas con  
actividad biológica y aplicación como antifúngico frente a Fusarium oxysporum y Aspergillus niger". Actualmente se encuentra  
adscrita a la Maestría en Ciencias de la Productividad Frutícola, Facultad de Ciencias Agrotecnológicas, Universidad Autónoma de  
Chihuahua con el tema de investigación titulado, "Identificación y caracterización del Virus Y de la papa en diferentes cultivares de  
papa del estado de Chihuahua".  
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Vol. VIII, Núm. 3 • Septiembre-Diciembre 2014 •