vasto lateral anterior al tracto iliotibial (Chen et al.,
2019). Aproximadamente 60-75 mg de músculo
esquelético de los atletas fueron recolectados y
congelados para su análisis posterior.
Análisis de la titina.
Las muestras fueron seccionadas en serie, con
espesura de 40 mm, utilizándose criostato y puestas
en un tampón de lisina, que contenía 10% de glicerol
(w/v), b-mercaptoetanol (50 g/l), 2% SDS (w/v), y
0.1% bromofenol azul en un 0.5 M Tris-HCl (pH 6.8).
Posteriormente, las muestras fueron puestas a 60 ºC
por 1 min. El procedimiento de SDS gel poliacrilamida
electroforesis (PAGE) se usó como procedimiento
patrón. Las muestras (5 ml) fueron dispuestas y
aceleradas utilizándose un sistema de electroforesis
Mini-proteína II (Bio-Rad, Hércules, CA), utilizando
el 2% de gel SDS-PAGE, reforzados con agarosa para
la separación de las bandas de titina. Se utilizó un
tampón patrón. La aceleración electroforética fue
realizada con 7 mA/2 placas por 30 min, seguido de
15 mA/2 placas entre 2 a 3 h en temperatura ambiente
(24 ºC). Todo el gel fue marcado con un colorante
coloidal, el marcador azul patrón de ICN Pharmaceu-
tics INC. (ICN, Costa Mesa, CA). El procesamiento de
la imagen fue hecho usándose un escáner liso (ScanJet
4C, Hewlett Packard, Palo Alto, CA) y una macro
representación gráfica del gel (Scionlmage, Versión
Beta 2, Frederick, MD), que posibilita el cálculo de
áreas de pico integradas para cada banda, expresada
en relación al área total (Dubowitz et al., 2013).
Western blotting.
La identificación inicial de las cantidades
porcentuales y de la movilidad relativa de las isoformas
T1 y T2 de titina se hizo por patrones de migración,
basándose en 2% de gel de poliacrilamida, reforzados
con agarosa. Adicionalmente, con una proteína patrón
se marcó la localización de la miosina en 205 Kd
(Kaleidoscope Prestarined Standard, Bio-Rad). La
inmunotransferencia fue usada para certificar la
identificación de las bandas de titina y la transferencia
por electroforesis para la membrana PtVDF se hizo a
30 V en un tampón con 192 mM de glicina, 25 mM
Tris, y 20% metanol con temperatura ambiente por
12 h, usando una Mini-proteína II TransBlotCell. Se
utilizó el anticuerpo primario monoclonal titin clone.
La visualización de la imunoreactividad se hizo por
medio de un anticuerpo secundario IgGgoatantimouse
y un reactivo con cloro peroxidasa, 4 cloro-1-naftol
horseradisch de la BioRad (Mahmood y Yang, 2012).
Programas de entrenamiento de flexibilidad.
Esta investigación se fundamenta en un estudio
de tipo longitudinal de 16 semanas que engloba tres
grupos, ya mencionados. Dos grupos realizaron
flexibilización en los niveles 61 a 80 de la escala
PERFLEX (Nodari et al., 2012). El primero de ellos
realizó tres series de 10 repeticiones de flexibilización
activa; el segundo, tres series con 10 s de flexibilización
pasiva; y el tercero se constituyó como grupo control,
realizando 3 series, 3 veces en la semana de elongación
activa, con 4 insistencias de 4 s de duración, en los
mismos niveles de la escala PERFLEX utilizados por
Soares et al. (2016). El intervalo entre las series de
elongación fue de 4 s (Dantas, 2018). Los sujetos
fueron distribuidos en los grupos, de acuerdo con la
flexibilidad de los cuádriceps, asegurándose que el
promedio de cada grupo no tuviera diferencias
significativas.
Procedimientos estadísticos.
A través de la prueba t Student pareado (SPSS
22.0) se determinó la diferencia entre los promedios
del porcentual de las isoformas T1 y T2 de titina, la
diferencia entre las alteraciones porcentuales de las
isoformas de titina, a causa de cada uno de los
entrenamientos de flexibilidad utilizados. Así como
las diferencias de los promedios de la movilidad
relativa de las isoformas T1 y T2 de titina y las modifi-
caciones porcentuales en la movilidad relativa de titina
en cada grupo, antes y después del entrena-miento de
flexibilidad propuesto. La prueba t Student indepen-
diente se usó para verificar la diferencia entre el efecto
de cada uno de los entrenamientos de flexibilidad
propuestos, sobre los promedios de la movilidad
relativa de las isoformas T1 y T2 de titina. Admitiendo
un nivel de significancia = 0.05, por lo que el rechazo
de H0 se dio siempre que p-valor < 0.05.
Ética del estudio.
El estudio fue realizado en la Universidad Federal
del Estado de Rio de Janeiro (UNIRIO), en el mes de
marzo de 2015 y fue aprobado por el Comité de Ética
de dicha institución el 30 de noviembre de 2014, de
acuerdo con el dictamen 1.846.335.